二、整體考慮

三、脂質(zhì)體藥物非臨床藥代動力學(xué)研究

（一）受試物

（二）研究內(nèi)容

2.1 吸收

2.2 分布

2.3 代謝

2.4 排泄

2.5 藥物相互作用

2.6脂質(zhì)體材料

（三）生物樣本分析

3.1 生物樣本中的穩(wěn)定性

3.2 生物樣本處理方法

3.3 分析方法及驗證

（四）數(shù)據(jù)分析及評價

四、其他需關(guān)注的問題

（一）不同給藥途徑脂質(zhì)體藥物的特殊考慮點

（二）PEG化長循環(huán)脂質(zhì)體的特殊考慮點

（三）細(xì)胞水平研究

（四）不同申報情況的考慮

脂質(zhì)體系指類脂雙分子層形成的微小囊泡。脂質(zhì)雙分子層內(nèi)部為水相隔室或被水相隔開，其粒徑大小可以從幾十納米到幾十微米。脂質(zhì)體藥物系指將一種或多種活性成分（Active Pharmaceutical Ingredient，API）包載于脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)或（和）水相內(nèi)而形成載藥脂質(zhì)體的一類藥物制劑。其中，粒徑處于納米級的脂質(zhì)體藥物是一類具有代表性的載體類納米藥物。

與普通藥物制劑相比，脂質(zhì)體通過對藥物的包載、結(jié)構(gòu)組成的調(diào)整和表面的修飾，可以提高藥物的體內(nèi)外穩(wěn)定性、改變活性成分的體內(nèi)過程，進(jìn)而可能改善藥物的藥代動力學(xué)特征，以期實現(xiàn)藥物的減毒、增效或（和）患者順應(yīng)性的提高。因此，對脂質(zhì)體藥物進(jìn)行科學(xué)和全面的藥代動力學(xué)研究，獲得基本藥代動力學(xué)參數(shù)，闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄（Absorption,  Distribution, Metabolism, Excretion, 簡稱ADME）的過程和特征，揭示其在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律，能夠為設(shè)計和優(yōu)化臨床試驗給藥方案提供有關(guān)參考信息，在脂質(zhì)體藥物研究開發(fā)的評價過程中發(fā)揮重要作用。

脂質(zhì)體藥物的組成、結(jié)構(gòu)、尺寸、表面性質(zhì)、藥物包封率、存在形式等可能顯著影響其穩(wěn)定性、藥物釋放以及脂質(zhì)體-生物膜之間的相互作用，進(jìn)而影響藥物的安全性和有效性。有關(guān)脂質(zhì)體藥物的組成、特點等相關(guān)信息參見《脂質(zhì)體藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》。

本指導(dǎo)原則主要適用于化學(xué)藥物脂質(zhì)體產(chǎn)品的非臨床藥代動力學(xué)研究，包括創(chuàng)新藥、改良型新藥和仿制藥。另外，部分脂質(zhì)體仿制藥可參考個藥指導(dǎo)原則（如適用）。雖然單抗、多肽或小分子等配體修飾形成的主動靶向脂質(zhì)體藥物以及環(huán)境響應(yīng)類脂質(zhì)體藥物在國內(nèi)外已有研究，但情況復(fù)雜，本指導(dǎo)原則暫不包括此類脂質(zhì)體藥物的非臨床藥代動力學(xué)研究，但整體思路和部分共性的非臨床藥代動力學(xué)研究可借鑒本指導(dǎo)原則，并根據(jù)品種具體特點進(jìn)行相應(yīng)的非臨床藥代動力學(xué)研究。

本指導(dǎo)原則在參考國內(nèi)外已上市脂質(zhì)體藥物的相關(guān)信息、相關(guān)指導(dǎo)原則、科研文獻(xiàn)等的基礎(chǔ)上，結(jié)合我國脂質(zhì)體藥物的研發(fā)現(xiàn)狀而起草，主要關(guān)注脂質(zhì)體藥物特有的技術(shù)要求，旨在為脂質(zhì)體藥物的非臨床藥代動力學(xué)研究提供技術(shù)指導(dǎo)，促進(jìn)脂質(zhì)體藥物的合理開發(fā)和有效監(jiān)管。

脂質(zhì)體藥物在遞送至組織后，通常通過以下過程發(fā)揮藥效作用：脂質(zhì)體藥物到達(dá)靶組織/靶部位后釋放活性成分，或活性成分自脂質(zhì)體釋放后到達(dá)組織/靶部位。

一般而言，脂質(zhì)體藥物的藥代動力學(xué)特征可能取決于：（1）包封活性成分的脂質(zhì)體藥物自身的清除；（2）包封的活性成分自脂質(zhì)體中的釋放速率；（3）未包封活性成分的清除和代謝；（4）脂質(zhì)體藥物的分布（器官和/或組織分布的變化以及分布的活性成分的量）；（5）脂質(zhì)體或活性成分與血漿或血清蛋白、血細(xì)胞或血管內(nèi)皮的相互作用等。

由于脂質(zhì)體的質(zhì)量屬性（如大小、表面電荷、形態(tài)和表面修飾等）可能影響脂質(zhì)體藥物的體內(nèi)分布，因此研究質(zhì)量屬性和體內(nèi)分布之間的關(guān)系有助于證明脂質(zhì)體藥物的合理性。

除此之外，與其他載體類納米藥物相比，脂質(zhì)體藥物具備自身特征，包括以兩親性脂質(zhì)作為主要載體材料，具有脂質(zhì)雙分子層和囊泡樣結(jié)構(gòu)（包括小單層脂質(zhì)體、大單層脂質(zhì)體、多層脂質(zhì)體、多囊泡脂質(zhì)體），藥物在脂質(zhì)體中具有獨特的空間分布和存在形式，因此，脂質(zhì)體藥物的非臨床藥代動力學(xué)研究具有其特殊性。

（一）受試物

脂質(zhì)體藥物的組成、結(jié)構(gòu)、尺寸、表面性質(zhì)、藥物包封率及存在形式等可能顯著影響其穩(wěn)定性、藥物釋放以及生物相互作用等，因此需特別關(guān)注受試物的質(zhì)量屬性。

應(yīng)采用工藝相對穩(wěn)定、能充分代表臨床擬用樣品的脂質(zhì)體藥物的受試物開展非臨床藥代動力學(xué)研究。

受試物在貯存、運輸、配制和測定過程中，其性質(zhì)有可能發(fā)生變化（如聚集、泄漏、結(jié)構(gòu)破壞等），從而導(dǎo)致動力學(xué)行為改變，而不能真實反映脂質(zhì)體藥物的藥代動力學(xué)特征，因此，在上述過程中需確保受試物的相關(guān)性質(zhì)不發(fā)生明顯改變。

基于脂質(zhì)體藥物的特殊性，對受試物的其他要求參見《脂質(zhì)體藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》。

（二）研究內(nèi)容

2.1 吸收

現(xiàn)有的脂質(zhì)體藥物多為靜脈給藥，但也存在其他給藥途徑，包括口服、吸入、經(jīng)皮和透皮、肌肉或皮下注射、鼻腔和眼內(nèi)給藥途徑等。脂質(zhì)體藥物與載體類納米藥物的吸收特征相似，因此可參照載體類納米藥物吸收研究要求開展脂質(zhì)體藥物的載藥脂質(zhì)體、活性成分和載體材料體內(nèi)吸收動力學(xué)試驗。

應(yīng)使用合適的動物種屬和/或模型，選取合適的劑量，并根據(jù)給藥方式，在吸收相、平衡相和消除相選擇合理的時間點和持續(xù)時間進(jìn)行采樣，測量藥物濃度，分析藥代動力學(xué)參數(shù)，包括：最大血藥濃度（Cmax）、血藥濃度-時間曲線下面積（AUC）、半衰期（t_1/2）等。應(yīng)討論脂質(zhì)體藥物制劑引起活性成分的藥代動力學(xué)變化。

在靜脈給藥的情況下，應(yīng)特別關(guān)注初始分布相內(nèi)（如，15分鐘以內(nèi)）的生物樣本采集，盡可能準(zhǔn)確地獲取藥代參數(shù)，以更好地描述脂質(zhì)體藥物在體內(nèi)的藥動學(xué)特征，并評估脂質(zhì)體在血液循環(huán)中的穩(wěn)定性。

聚乙二醇（Polyethylene glycol，PEG）化脂質(zhì)在脂質(zhì)體中作為載體材料被廣泛應(yīng)用，含有PEG化脂質(zhì)的脂質(zhì)體藥物可能存在“加速血液清除”（Accelerated Blood Clearance, ABC）現(xiàn)象。因此，此類脂質(zhì)體藥物在多次給藥試驗時，需要關(guān)注ABC現(xiàn)象，及是否存在抗PEG抗體。當(dāng)存在ABC現(xiàn)象時，PEG化脂質(zhì)體在注射給藥后清除較快，更應(yīng)關(guān)注采血時間點的合理設(shè)計。

2.2 分布

脂質(zhì)體藥物的體內(nèi)分布研究與載體類納米藥物聚焦的問題基本相同，需重點關(guān)注載藥脂質(zhì)體-游離型藥物-載體材料多種形態(tài)的動態(tài)變化過程。應(yīng)評估脂質(zhì)體藥物在與擬定臨床用途和給藥途徑相關(guān)的靶器官和/或組織中的分布。

目前，大多數(shù)研究關(guān)注血液中游離型藥物/負(fù)載型藥物以及組織中總藥物的暴露量，但是，靶組織與其他非靶組織中的藥物濃度，特別是游離藥物濃度，是評價脂質(zhì)體藥效和毒性的關(guān)鍵，因此建議進(jìn)行脂質(zhì)體藥物組織中游離型藥物/負(fù)載型藥物的測定。

在組織分布研究時，參考血藥濃度-時間曲線的變化趨勢，選擇至少3個時間點進(jìn)行采樣（包括吸收相、平衡相和消除相）。另外，應(yīng)根據(jù)給藥途徑選擇具有重要功能的器官，如：涉及藥效和毒性的器官、與清除有關(guān)的重要器官、易于蓄積的器官（如肝、脾、腎、骨髓、肺和心臟）、受血-組織屏障保護(hù)的器官（如腦、胎盤和睪丸等）。一些具有特殊毒性器官的脂質(zhì)體藥物，需要根據(jù)具體情況制定試驗方案。

此外，對于表面上含有配體或抗體的主動靶向脂質(zhì)體藥物，應(yīng)同時關(guān)注這些特殊功能修飾所引起的其在靶器官/組織及其他器官/組織中的分布差異。

2.3 代謝

脂質(zhì)體負(fù)載的活性成分或構(gòu)成脂質(zhì)體的載體材料，在脂質(zhì)體藥物的尺度效應(yīng)下，可能會呈現(xiàn)出與游離狀態(tài)不同的分布和轉(zhuǎn)運特性，導(dǎo)致其分布的組織、細(xì)胞及細(xì)胞器與游離狀態(tài)下有所不同，并且因而可能產(chǎn)生新的代謝途徑以及代謝產(chǎn)物。因此，應(yīng)確定活性成分和載體材料的主要代謝/降解途徑和機制，并對其代謝/降解產(chǎn)物進(jìn)行表征/鑒定。

當(dāng)脂質(zhì)體藥物的主要代謝產(chǎn)物具有生物活性時，需要對血液、血漿或血清（建議也包括器官和/或組織）中活性代謝產(chǎn)物進(jìn)行藥代動力學(xué)研究，并建議進(jìn)行多次給藥以考察蓄積情況，必要時進(jìn)行毒代動力學(xué)研究。

對于某些脂質(zhì)體藥物，其負(fù)載的活性成分在被脂質(zhì)體轉(zhuǎn)運并釋放至生物環(huán)境中后會被迅速代謝，測定游離型藥物可能存在困難，可以用其代謝產(chǎn)物間接研究游離型藥物的藥代動力學(xué)。

2.4 排泄

脂質(zhì)體的理化性質(zhì)，如脂質(zhì)體成分、尺寸、電荷以及表面修飾等，在其體內(nèi)清除的過程中起著關(guān)鍵作用。脂質(zhì)體藥物的排泄特征與載體類納米藥物相似，在此不再進(jìn)行贅述。

需要注意的是，某些藥物或載體材料并不以原形進(jìn)行排泄，需要鑒定其代謝產(chǎn)物，然后根據(jù)藥物或載體材料的具體情況對其開展排泄研究。

2.5 藥物相互作用

脂質(zhì)體藥物進(jìn)入體內(nèi)后，載藥脂質(zhì)體、游離型藥物、載體材料都可能會對代謝酶和轉(zhuǎn)運體產(chǎn)生影響。聯(lián)合用藥時，可能發(fā)生基于載藥脂質(zhì)體、游離型藥物、載體材料與其他藥物之間的相互作用，而帶來潛在的安全性風(fēng)險。因此，應(yīng)根據(jù)脂質(zhì)體藥物與其相應(yīng)的普通制劑藥代動力學(xué)特征的差異，考察脂質(zhì)體藥物的藥物相互作用風(fēng)險。若缺乏普通制劑的藥物相互作用研究資料，應(yīng)首先考察活性成分對藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體的影響及其聯(lián)合用藥時的藥物相互作用風(fēng)險。

載藥脂質(zhì)體進(jìn)入機體后，可能會與蛋白發(fā)生結(jié)合，在其表面形成蛋白冠，進(jìn)而影響載藥脂質(zhì)體的藥物釋放、血液循環(huán)時間、靶向性、生物分布、免疫反應(yīng)、細(xì)胞攝取和毒性等行為。因此，鼓勵進(jìn)行載藥脂質(zhì)體蛋白冠的表征。

2.6 脂質(zhì)體材料

脂質(zhì)體藥物中不同類型的脂質(zhì)體材料，由于其理化性質(zhì)的特殊性，可能與不同的蛋白質(zhì)結(jié)合，進(jìn)而影響脂質(zhì)體藥物在體內(nèi)的生物學(xué)行為和藥理學(xué)特性等，甚至可能引起藥物突釋而產(chǎn)生安全性問題。因此，對于新的脂質(zhì)體材料，或藥代動力學(xué)資料缺乏或不足的脂質(zhì)體材料，建議對其進(jìn)行藥代動力學(xué)研究。在研究時，應(yīng)關(guān)注脂質(zhì)體材料本身與其脂質(zhì)體形態(tài)的體內(nèi)命運可能不同。

如脂質(zhì)體處方成分的類別和結(jié)構(gòu)與先前研究過的脂質(zhì)體藥物所用材料相同時，可提供已有的相關(guān)數(shù)據(jù)。如脂質(zhì)體處方成分的類別相同，而結(jié)構(gòu)與之前研究過的脂質(zhì)體藥物所用材料不同時，由于結(jié)構(gòu)改變可能會對脂質(zhì)體的分布、代謝等藥代行為產(chǎn)生影響，建議必要時對此類脂質(zhì)體材料進(jìn)行藥代動力學(xué)研究。

（三）生物樣本分析

應(yīng)開發(fā)合適的能夠測定生物樣本中藥物濃度（總濃度和/或游離型藥物濃度，必要時為負(fù)載型藥物濃度）的分析方法。

3.1 生物樣本中的穩(wěn)定性

應(yīng)對脂質(zhì)體藥物在適當(dāng)動物種屬的全血或血漿、其他體液、排泄物、生物組織勻漿液等中的體外穩(wěn)定性進(jìn)行研究。同時，應(yīng)對脂質(zhì)體藥物在分析試驗條件下（如鹽濃度、pH 值、溫度或加入的其他試劑等）的體外釋放行為進(jìn)行研究。觀察指標(biāo)包括脂質(zhì)體藥物泄漏或釋放情況、載體材料降解情況等。

3.2 生物樣本處理方法

生物樣本在采集之后的貯存、運輸、凍融過程中應(yīng)當(dāng)保證樣本的穩(wěn)定。如在上述過程無法中保持脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，在采集樣本后，應(yīng)及時對其進(jìn)行處理，如加入穩(wěn)定劑，或?qū)⒅|(zhì)體釋放的游離藥物/載體材料與脂質(zhì)體藥物進(jìn)行分離后再分別進(jìn)行貯存等，以避免在冷凍貯存過程中脂質(zhì)體發(fā)生破裂，干擾后續(xù)脂質(zhì)體藥物不同組分的測定。

脂質(zhì)體藥物在進(jìn)入體內(nèi)后，活性成分一般會以游離型藥物與負(fù)載型藥物的形式存在，在進(jìn)行生物樣本分析時需要對二者進(jìn)行有效分離。分離生物樣本中游離型/負(fù)載型藥物的常用方法包括平衡透析、超速離心、超濾、固相萃取、排阻色譜、柱切換色譜等。選取的分離方法應(yīng)防止脂質(zhì)體制劑在分離的過程中發(fā)生泄漏或破裂。

此外，在游離型和負(fù)載型藥物分離過程中，應(yīng)對與血漿蛋白結(jié)合的藥物與負(fù)載型藥物進(jìn)行區(qū)分?？梢圆捎猛凰匦Ｕ蚱渌椒ǐ@得不同藥物形態(tài)的真實濃度。

組織分布研究中，脂質(zhì)體藥物極易在組織處理過程中發(fā)生滲漏或破裂，所以應(yīng)注意脂質(zhì)體樣本在組織樣本處理過程中的穩(wěn)定性。

3.3 分析方法及驗證

試驗時需根據(jù)脂質(zhì)體藥物制劑的具體情況采用合適并經(jīng)過驗證的分析方法?；钚猿煞?、載藥脂質(zhì)體和載體材料的常用分析方法可參見《納米藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》。

建立脂質(zhì)體藥物生物樣本分析方法時，應(yīng)考慮載藥脂質(zhì)體以及載體材料對方法的影響。需要關(guān)注的是，校正曲線和質(zhì)控樣本的制備和處理應(yīng)模擬給藥后載藥脂質(zhì)體、游離型藥物、負(fù)載型藥物、載體材料的體內(nèi)實際狀態(tài)（真實場景）。

分析方法學(xué)驗證內(nèi)容參照相關(guān)指導(dǎo)原則。

（四）數(shù)據(jù)分析及評價

應(yīng)有效整合各項試驗數(shù)據(jù)，對測定獲得的脂質(zhì)體藥物的游離型藥物、負(fù)載型藥物、總藥物濃度進(jìn)行比較分析，對上述三種形態(tài)分別進(jìn)行非房室/房室模型參數(shù)的求算，如用計算機處理數(shù)據(jù)，應(yīng)注明所用程序的名稱、版本和來源，并對其可靠性進(jìn)行確認(rèn)。

鼓勵根據(jù)脂質(zhì)體藥物體內(nèi)游離型藥物濃度、負(fù)載藥物濃度兩者之間的時程變化過程建立整體生理藥代動力學(xué)或最簡生理藥代動力學(xué)模型來描述體內(nèi)游離型藥物和負(fù)載型藥物兩者之間的轉(zhuǎn)化過程，以及血漿、靶組織和非靶組織的藥物分布動力學(xué)時程關(guān)系。

對于不同給藥途徑的脂質(zhì)體藥物，在進(jìn)行非臨床藥代動力學(xué)研究時，除了上文所涉及的研究內(nèi)容外，尚需要關(guān)注以下內(nèi)容：對于局部給藥的脂質(zhì)體藥物，在非臨床藥代動力學(xué)研究評價中應(yīng)關(guān)注脂質(zhì)體藥物全身的吸收、組織分布與蓄積情況。同時，與一般給藥途徑相比，局部給藥通常會導(dǎo)致局部器官或組織濃度過高，進(jìn)而可能導(dǎo)致潛在的毒性，應(yīng)根據(jù)不同的給藥途徑具體分析。

（二）PEG化長循環(huán)脂質(zhì)體的特殊考慮點

含有PEG化脂質(zhì)的脂質(zhì)體可以在體內(nèi)保持長循環(huán)，但在重復(fù)給藥時可能會發(fā)生ABC現(xiàn)象，并且還可能減少細(xì)胞對脂質(zhì)體的融合和內(nèi)吞，降低脂質(zhì)體的內(nèi)體逃逸效率。因此，建議在體外對血漿中長循環(huán)脂質(zhì)體中的PEG化脂質(zhì)進(jìn)行脫落動力學(xué)研究。

（三）細(xì)胞水平研究

許多脂質(zhì)體負(fù)載著作用于細(xì)胞內(nèi)靶點的藥物，此類脂質(zhì)體藥物能否高效地進(jìn)入靶細(xì)胞，能否在靶細(xì)胞內(nèi)快速釋放藥物，釋放出的游離藥物能否與靶點有效結(jié)合，以脂質(zhì)體的形式進(jìn)入細(xì)胞后能否減少靶細(xì)胞中的藥物外排，這些都是影響脂質(zhì)體藥物發(fā)揮藥效的關(guān)鍵因素。在脂質(zhì)體處方研究過程中，鼓勵對載藥脂質(zhì)體的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運過程進(jìn)行研究。

（四）不同申報情況的考慮

[1] FDA. Guidance for Industry: Liposome Drug Products Chemistry, Manufacturing, and Controls; Human Pharmacokinetics and Bioavailability;  and Labeling Documentation. 2015.

[2] FDA. Guidance for Industry: Considering Whether an FDA-Regulated Product Involves the Application of Nanotechnology. 2014.

[3] FDA. Guidance for Industry: Drug Products, Including Biological Products, that Contain Nanomaterials. 2022.

[4] EMA. Data requirements for intravenous liposomal products developed with reference to an innovator liposomal product. 2013.

[5] MHLW. Guideline for the Development of Liposome Drug Products. 2016.

[6] NMPA. 納米藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）. 2021.